Kuantifikasi NAD + dan Metabolitnya dalam Saraf Sciatic Tikus

Pengenalan

Bahagian penting nicotinamide adenine dinucleotide (NAD +) dan metabolitnya dalam penuaan dan neurodegenerasi telah diiktiraf secara meluas. Untuk memacu kemajuan ke arah penyelidikan dan intervensi biokimia yang menyasarkan penuaan dan penyakit neurodegeneratif, adalah sangat penting untuk mengukur NAD + dan tahap metabolitnya dengan tepat dalam laluan penyelamat NAD +. Di sini, kaedah LC-MS/MS yang teguh dan tepat digunakan untuk mengukur NAD+ dan tahap metabolitnya dalam saraf sciatic tikus yang normal dan cedera.

Had kaedah sedia ada untuk mengukur NAD + dan metabolitnya

Kaedah tradisional untuk mengukur NAD+ dan metabolitnya, seperti HPLC-UV, NMR, elektroforesis zon kapilari, atau ujian enzimatik kolorimetrik, menghadapi pelbagai cabaran dalam kepekaan, selektiviti dan pengukuran tidak langsung. Bagi ujian LC-MS/MS sedia ada untuk NAD selular atau tisu + dan pengukuran metabolitnya, masih terdapat banyak kesukaran untuk diatasi, seperti masa larian yang dilanjutkan, tingkah laku pengekalan kromatografi yang lemah dan bentuk puncak yang tidak memuaskan. Selain itu, hanya satu hingga tiga bahan dalam laluan penyelamat NAD+ boleh dilindungi oleh kaedah ini.

Pengubahsuaian kaedah LC-MS / MS

Berdasarkan ujian LC-MS/MS sedia ada, pengubahsuaian mengenai keadaan kromatografi, matriks pengganti dan keadaan MS/MS dijalankan. Khususnya, 5 μM asid metilen fosfonik digunakan sebagai bahan tambahan fasa mudah alih, yang secara eksplisit menggalakkan keamatan isyarat dan bentuk puncak. Memandangkan sifat sampel yang agak bersih dan ringkas dan saiznya yang kecil, air ultratulen diuji sebagai matriks pengganti. Daripada lajur kromatografi cecair interaksi hidrofilik dan lajur hiperkarbohidrat, lajur Waters Atlantis Premier BEH C18 AX digunakan, yang teknologi permukaan berprestasi tinggi MaxPeak HPS yang unik (mengpasifkan dinding dalam lajur, menghapuskan permukaan logam) membolehkan kebolehulangan yang tinggi, simetri puncak dan pemisahan asas semua analit.Selain itu, keadaan MS dioptimumkan untuk meminimumkan isyarat gangguan NAD+ dalam saluran kitaran adenosin difosfat ribose (cADPR) sambil mengekalkan tindak balas cADPR dan nicotinamide mononucleotide (NMN), dengan 4000V untuk voltan semburan ion, 450°C untuk suhu pemanas turbo, 50 psi untuk Gas 1, 50 psi untuk Gas 2, 30 psi untuk gas tirai dan 12 psi untuk gas perlanggaran.

Kromatogram perwakilan sampel saraf (normal vs cedera)

Kesemua lima analit mencapai pemisahan asas, di mana cADPR ialah biomarker sensitif dalam model neurodegenerasi. Di sini, akbotomi saraf sciatic mendorong degenerasi aksonal, yang membawa kepada pengurangan tahap NAD + dan peningkatan tahap NMN dalam saraf yang cedera, mengakibatkan peningkatan kira-kira 2 kali ganda dalam nisbah NMN/NAD +. Pada masa yang sama, tahap nikotinamida (NAM) dan adenosin difosfat ribose (ADPR), berkurangan kira-kira 2 kali ganda, manakala tahap cADPR meningkat lebih daripada 8 kali ganda. Keputusan ini konsisten dengan penyelidikan yang dilaporkan sebelum ini, mengesahkan ketepatan kaedah LS-MS/MS yang diubah suai ini dalam mengukur NAD + dan metabolitnya.

Kesimpulan

Kaedah LC-MS/MS yang diubah suai ini membolehkan pemisahan asas NAD +, NMN, NAM, ADPR dan cADPR yang berkesan dalam masa jalan singkat 5 minit, yang menyumbang kepada diagnosis awal pelbagai gangguan neurologi dan pembangunan ubat untuk penuaan dan penyakit neurodegeneratif.

Rujukan

Ma Y, Deng L, Du Z. Pembangunan dan pengesahan kaedah LC-MS/MS untuk mengukur NAD + dan metabolit berkaitan dalam saraf sciatic tikus dan penggunaannya pada model haiwan kecederaan saraf. J Chromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821

BONTAC NAD

BONTAC telah didedikasikan untuk R&D, pembuatan dan penjualan bahan mentah untuk koenzim dan produk semula jadi sejak 2012, dengan kilang milik sendiri, lebih 170 paten global serta pasukan R&D yang kuat. BONTAC mempunyai pengalaman R&D yang kaya dan teknologi canggih dalam biosintesis NAD dan pendahulunya (cth. NMN dan NR). Terdapat pelbagai jenis NAD untuk dipilih, merangkumi Gred NAD ER (penyingkiran endoksin), NAD Gred I (IVD/suplemen makanan/serbuk mentah kosmetik), NAD Gred II (API/perantaraan) dan NAD Gred IV (jika ada keperluan yang lebih tinggi pada keterlarutan), yang boleh disediakan dalam bentuk serbuk liofilisasi atau serbuk kristal. Ketulenan BONTAC NAD boleh mencapai melebihi 98%.

Penafian

Artikel ini berdasarkan rujukan dalam jurnal akademik. Maklumat yang berkaitan disediakan untuk tujuan perkongsian dan pembelajaran sahaja, dan tidak mewakili sebarang tujuan nasihat perubatan. Jika terdapat sebarang pelanggaran, sila hubungi pengarang untuk pemadaman. Pandangan yang dinyatakan dalam artikel ini tidak mewakili kedudukan BONTAC. Dalam apa jua keadaan, BONTAC tidak akan bertanggungjawab atau bertanggungjawab dalam apa jua cara untuk sebarang tuntutan, kerosakan, kerugian, perbelanjaan atau kos yang terhasil atau timbul secara langsung atau tidak langsung daripada pergantungan anda pada maklumat dan bahan di laman web ini.