Kuantifikasi NAD+ dan Metabolitnya dalam Saraf Sciatic Tetikus
Pengenalan
Bahagian penting nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+) dan metabolitnya dalam penuaan dan neurodegenerasi telah diiktiraf secara meluas. Untuk memacu kemajuan ke arah penyelidikan biokimia dan intervensi yang menyasarkan penuaan dan penyakit neurodegeneratif, adalah sangat penting untuk mengukur NAD+ dan tahap metabolitnya dengan tepat dalam laluan penyelamatan NAD+. Di sini, kaedah LC-MS/MS yang teguh dan tepat digunakan untuk mengukur NAD+ dan tahap metabolitnya dalam saraf sciatic tetikus yang normal dan cedera.
Had kaedah sedia ada untuk mengukur NAD+ dan metabolitnya
Kaedah tradisional untuk mengukur NAD+ dan metabolitnya, seperti HPLC-UV, NMR, elektroforesis zon kapilari, atau ujian enzimatik kolorimetri, menghadapi pelbagai cabaran dalam sensitiviti, selektiviti dan pengukuran tidak langsung. Bagi ujian LC-MS/MS sedia ada untuk NAD+ selular atau tisu dan pengukuran metabolitnya, masih terdapat banyak kesukaran yang perlu diatasi, seperti masa larian yang dilanjutkan, tingkah laku pengekalan kromatografi yang lemah dan bentuk puncak yang tidak memuaskan. Selain itu, hanya satu hingga tiga bahan dalam laluan penyelamatan NAD+ boleh dilindungi oleh kaedah ini.
Pengubahsuaian kaedah LC-MS/MS
Berdasarkan ujian LC-MS/MS sedia ada, pengubahsuaian mengenai keadaan kromatografi, matriks pengganti dan keadaan MS/MS dijalankan. Secara khusus, 5 μM asid metilena fosfornik digunakan sebagai bahan tambahan fasa bergerak, yang secara eksplisit menggalakkan keamatan isyarat dan bentuk puncak. Memandangkan sifat sampel yang agak bersih dan ringkas dan saiznya yang kecil, air ultratulen diuji sebagai matriks pengganti. Daripada lajur kromatografi cecair interaksi hidrofilik dan lajur hiperkarbohidrat, lajur Waters Atlantis Premier BEH C18 AX digunakan, yang teknologi permukaan berprestasi tinggi MaxPeak HPS yang unik (mempasifkan dinding dalam lajur, menghapuskan permukaan logam) membolehkan kebolehulangan yang tinggi, simetri puncak dan pemisahan garis dasar semua analit.Selain itu, keadaan MS dioptimumkan untuk meminimumkan isyarat gangguan NAD+ dalam saluran ribosa adenosin difosfat kitaran (cADPR) sambil mengekalkan tindak balas cADPR dan nikotinamida mononukleotida (NMN), dengan 4000V untuk voltan semburan ion, 450°C untuk suhu pemanas turbo, 50 psi untuk Gas 1, 50 psi untuk Gas 2, 30 psi untuk gas langsir, dan 12 psi untuk gas perlanggaran.
Kromatografi perwakilan sampel saraf (normal vs cedera)
Kelima-lima analit mencapai pemisahan asas, di mana cADPR ialah biomarker sensitif dalam model neurodegenerasi. Di sini, aksotomi saraf sciatic mendorong degenerasi aksonal, yang membawa kepada pengurangan tahap NAD+ dan peningkatan tahap NMN dalam saraf yang cedera, mengakibatkan peningkatan kira-kira 2 kali ganda dalam nisbah NMN/NAD+. Pada masa yang sama, tahap nikotinamida (NAM) dan adenosin difosfat ribosa (ADPR), berkurangan kira-kira 2 kali ganda, manakala tahap cADPR meningkat lebih daripada 8 kali ganda. Keputusan ini konsisten dengan penyelidikan yang dilaporkan sebelum ini, mengesahkan ketepatan kaedah LS-MS/MS yang diubah suai ini dalam mengukur NAD+ dan metabolitnya.
Kesimpulan
Kaedah LC-MS/MS yang diubah suai ini membolehkan pemisahan asas NAD+, NMN, NAM, ADPR dan cADPR yang berkesan dalam masa jalan yang singkat selama 5 minit, yang menyumbang kepada diagnosis awal pelbagai gangguan neurologi dan pembangunan ubat untuk penuaan dan penyakit neurodegeneratif.
Rujukan
Ma Y, Deng L, Du Z. Pembangunan dan pengesahan kaedah LC-MS/MS untuk mengukur NAD+ dan metabolit berkaitan dalam saraf sciatic tikus dan aplikasinya kepada model haiwan kecederaan saraf. J Chromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821
BONTAC NAD
BONTAC telah didedikasikan untuk R&D, pembuatan dan penjualan bahan mentah untuk koenzim dan produk semula jadi sejak 2012, dengan kilang milik sendiri, lebih daripada 170 paten global serta pasukan R&D yang kuat. BONTAC mempunyai pengalaman R&D yang kaya dan teknologi canggih dalam biosintesis NAD dan pendahulunya (cth. NMN dan NR). Terdapat pelbagai jenis NAD yang boleh dipilih, merangkumi Gred NAD ER (penyingkiran endoksin), Gred I NAD (IVD/makanan tambahan/serbuk mentah kosmetik), Gred II NAD (API/perantaraan) dan NAD Gred IV (jika ada keperluan yang lebih tinggi pada keterlarutan), yang boleh disediakan dalam bentuk serbuk liofilisasi atau serbuk kristal. Ketulenan BONTAC NAD boleh mencapai melebihi 98%.
Penafian
Artikel ini berdasarkan rujukan dalam jurnal akademik. Maklumat yang berkaitan disediakan untuk tujuan perkongsian dan pembelajaran sahaja, dan tidak mewakili sebarang tujuan nasihat perubatan. Jika terdapat sebarang pelanggaran, sila hubungi pengarang untuk pemadaman. Pandangan yang dinyatakan dalam artikel ini tidak mewakili kedudukan BONTAC. Dalam apa jua keadaan, BONTAC tidak akan dipertanggungjawabkan atau dipertanggungjawabkan dalam apa jua cara untuk sebarang tuntutan, kerosakan, kerugian, perbelanjaan atau kos yang terhasil atau timbul secara langsung atau tidak langsung daripada pergantungan anda terhadap maklumat dan bahan di laman web ini.