超灵敏 ELISA 结合硫代-NAD 循环在检测登革热 NS1 蛋白中的卓越优点
1. Pengenalan
Demam denggi ialah penyakit berjangkit akut yang disebabkan olehvirus Denggi melalui gigitan nyamuk spesies Aedes yang dijangkiti (Ae. aegypti atau Ae. albopictus),dengan gejala utama seperti demam panas, pening, sakit kepala, ruam dansakit yang teruk (sakit mata, otot, sendi, atau tulang), dsb. Penyakit ini berleluasa di iklim tropika dan subtropika. Dianggarkan 100 hingga 400 juta orang dijangkiti setiap tahun, di mana lebih 80% biasanya ringan dan tanpa gejala. Walau bagaimanapun, demam denggi yang teruk boleh meningkatkan risiko kematian jika tidak dirawat dengan betul. Oleh itu, diagnosis awal penyakit ini adalah penting untuk rawatan yang tepat pada masanya.Perlu diperhatikan, protein bukan struktur 1 (NS1), glikoprotein yang sangat terpelihara, terutamanya dirembeskan semasa jangkitanvirusDenggi, yang secara intensif dianggap sebagai faktor patogenesis utamademam denggi. Oleh itu, NS1 biasanya digunakan sebagai biomarker untuk pengesanan awal penyakit ini.
Dalam kajian ini, ujian imunoserapan berkait enzim sandwic (ELISA) yang digabungkan dengankaedah kitaran tio nikotinamida adenina dinukleotida (thio-NAD/S-NAD)(selepas ini dirujuk sebagai ELISA ultra-sensitif) digunakan untuk mengesan NS1, diikuti dengan perbandingan dengan NAAT untuk mengesahkan ketepatan pengesanannya.
2. Kelebihan dan kekurangan kaedah pengesanan tradisional untukdemam denggi
Pada masa ini, terdapat empat kaedah pengesanan utamauntuk demam denggi.
Pengasingan virus dan pengenalpastian mempunyai kekhususan yang tinggi tetapi memakan masa, mengambil sekurang-kurangnya 5 hari. Ujian antigen pantas adalah yang paling cepat dan paling kos efektif antara kaedah lain, tetapi sensitiviti dan kekhususan agak rendah. Ujian serologi berdasarkan IgM dan IgG dihadkan oleh bilangan hari jangkitan, keranatahapujian mesti ditangguhkan sehingga tahap antibodi meningkat ke tahap yang boleh dikesan.
Dalam klinik, NAAT sering digunakan untuk menentukandemam denggi kerana sensitiviti dan kekhususannya yang tinggi. Walau bagaimanapun, kaedah ini mahal, memerlukan tenaga kerja, dan mudah terdedah kepada positif palsu, yang mesti dijalankan oleh kakitangan terlatih.Untuk mengatasi kelemahan kaedah ini, kaedah pengesanan baharuELISA ultra-sensitif digunakan dalam kajian ini.
3. Aliran kerja ELISA ultra-sensitif dengan kitaran thio-NAD
Sepasang antibodiis digunakan untuk menangkap protein NS1 dalam ELISA sandwic, dan alkali fosfataseis dilabelkan pada antibodi sekunder. Selain antibodi, derivatif androsteron, 3α-hidroksisteroid dehidrogenase, thio-NAD, dan NADHialah digunakan untuk membina sistem kitaran enzim thio-NAD. Semasa tindak balas kitaran thio-NAD, thio-NADH terkumpul secara berterusan dalam bentuk nombor segi tiga dan boleh diukur secara langsung pada penyerapan 405 nm.
4. Perbandingan ELISA ultra-sensitif dan NAAT dalam pengesanan Protein NS1 Denggi
Dalam NAAT, 60 spesimen adalah positif denggi, dan 25 adalah negatif denggi. Nilai ambang kitaran (CT) NAAT bagi spesimen positif denggi tersebut berkisar antara 12.42 hingga 31.41.Dalam ELISA ultra-sensitif, 59 spesimen sepadan positif dengan keputusan NAAT, manakala 25 spesimen sepadan sepenuhnya negatif dengan keputusan NAAT.Berbanding dengan NAAT, sensitiviti dan kekhususan ELISA ultra-sensitif ialah 98.3% dan 100%, masing-masing (Jadual 2). Daripada 60 spesimen pesakit positif denggi yang disahkan NAAT, hanya 1 spesimen negatif dalam ELISA ultra-sensitif. Data NAAT menunjukkan bahawa spesimen tersebut ialah kes jangkitan DENV jenis 4 dengan nilai CT 21.59. Keputusan ELISA ultra-sensitif hampir sepenuhnya bersetuju dengan keputusan NAAT, dengan nilai kappa 0.972 (95% CI: 0.917-1.0).
5. Kesimpulan
UKaedah ELISA ultra-sensitif mudah dilakukan dan tidak memerlukan jurulatih profesional untuk mengendalikan.Pengesanan boleh dimulakan serta-merta selepas menerima sampel kecil. Ia amat sesuai untuk pengesanan awalviruspenyakit di negara berpendapatan rendah.Rujukan
Chen, Po-Kai et al. “Advanced Detection Method for Dengue NS1 Protein Using Ultrasensitive ELISA with Thio-NAD Cycling.” Viruses vol. 15,9 1894. 8 Sep. 2023, doi:10.3390/v15091894BONTAC NR-CL的BONTAC Thio-NAD/S-NAD
BONTAC ialah salah satu daripada beberapa perusahaan diChina yang boleh menghasilkan Thio-NAD, dengan“Bonzyme” Kaedah enzim penuh (无有害溶剂残留;。NADPH的纯度可达) dan teknologi penulenan tujuh langkah “Bonpure” yang unik. BONTAC mengintegrasikan R&D, pengeluaran dan jualan, dengan kilang milik sendiri dan beberapa pensijilan antarabangsa untuk memastikan kualiti tinggi dan bekalan produk yang stabil.
