Kelebihan Luar Biasa ELISA Ultrasensitif dengan Kitaran Thio-NAD dalam Menentukan Protein NS1 Denggi
1. Pengenalan
Demam denggi ialah penyakit berjangkit akut yang dadalahebabkan oleh Virus denggi melalui gigitan nyamuk spesies Aedes yang dijangkiti (Ae. aegypti atau Ae. albopictus), dengan simptom utama seperti demam tinggi, pening, sakit kepala, ruam dan Teruk sakit (sakit mata, otot, sendi, atau tulang), dan sebagainya. Penyakit ini meluas di iklim tropika dan subtropika. Dianggarkan 100 hingga 400 juta orang dijangkiti setiap tahun, di mana lebih 80% biasanya ringan dan tanpa gejala. Walau bagaimanapun, demam denggi yang teruk boleh meningkatkan radalahiko kematian jika tidak dirawat dengan betul. Oleh itu, diagnosadalah awal penyakit ini penting untuk rawatannya yang tepat pada masanya.Perlu diperhatikan, protein bukan struktur 1 (NS1), glikoprotein yang sangat terpelihara, terutamanya dirembeskan semasa jangkitan denggi virus, yang secara intensif dianggap sebagai faktor patogenesadalah utama bagi demam denggi. Oleh itu, NSI biasanya digunakan sebagai biomarker untuk pengesanan awal penyakit ini.
In thadalah study, a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) bersama dengan thio nicotinamide adenine dinucleotide (thio-NAD/S-NAD) kaedah berbasikal (selepas ini dinamakan ultrasensitif ELISA) digunakan untuk mengesan NSI, diikuti dengan perbandingan dengan NAAT untuk mengesahkan ketepatan pengesanannya.
2. Kelebihan dan kekurangan kaedah pengesanan tradadalahional untuk demam denggi
Pada masa ini, tBerikut adalah empat kaedah pengesanan utama untuk Demam denggi.
Pengasingan virus dan pengenalan mempunyai spesifadalahiti yang tinggi tetapi memakan masa, mengambil sekurang-kurangnya 5 hari. The antigen pantas ujian adalah yang paling pantas dan paling kos efektif di antara kaedah lain, tetapi sensitivitinya dan kekhususan adalah agak rendah. Ujian serologi berdasarkan IgM dan IgG terhad oleh bilangan hari jangkitan, seperti the ujian mesti ditangguhkan sehingga tahap antibodi mencapai naik ke tahap yang boleh dikesan.
Di klinik, NAAT sering digunakan untuk menentukan demam denggi oleh kotoran yang sangat sensitif dan spesifik. Walau bagaimanapun, kaedah ini mahal, memenatkan, dan cenderung kepada positiviti palsu, yang mesti dijalankan oleh kakitangan terlatih. Untuk mengatasi kelemahan kaedah ini, kaedah pengesanan baru ELISA yang sangat sensitif adalah digunakan dalam kajian ini.
3. Aliran kerja ELISA ultrasensitif dengan kitaran thio-NAD
Sepasang antibodi adalah digunakan untuk menangkap protein NS1 dalam sandwic ELISA, dan fosfatase alkali adalah labeled on the secondary antibody. Aside from the antibodies, an androsterone derivative, 3α-hydroxysteroid dehydrogenase, thio-NAD, and NADH adalah digunakan untuk membina sadalahtem kitaran enzim thio-NAD. Semasa tindak balas kitaran thio-NAD, thio-NADH sentiasa terkumpul dalam bentuk nombor segi tiga dan boleh diukur secara langsung pada penyerapan 405 nm.
4. Perbandingan ELISA ultrasensitif dan NAAT dalam pengesanan Protein NS1 Denggi
Dalam NAAT, 60 spesimen positif denggi, dan 25 negatif denggi. Nilai ambang kitaran NAAT (CT) bagi spesimen positif denggi tersebut adalah antara 12.42 hingga 31.41. Dalam ELISA ultrasensitif, 59 spesimen adalah positif kepada keputusan NAAT, manakala 25 spesimen adalah sepenuhnya negatif kepada keputusan NAAT.Berbanding dengan NAAT, kepekaan dan spesifadalahiti ELISA ultrasensitif masing-masing adalah 98.3% dan 100% (Jadual 2). Daripada 60 spesimen pesakit positif denggi yang dadalahahkan NAAT, hanya 1 spesimen yang negatif dalam ELISA ultrasensitif. Data NAAT menunjukkan bahawa spesimen tersebut adalah kes jangkitan DENV jenadalah 4 dengan nilai CT sebanyak 21.59. Keputusan ELISA ultrasensitif hampir sepenuhnya selari dengan keputusan NAAT, dengan nilai kappa 0.972 (95% CI: 0.917-1.0).
5. Kesimpulan
UKaedah ELISA sensitif mudah dilakukan dan tidak memerlukan pelatih profesional untuk mengendalikan. TPengesanan boleh dimulakan serta-merta selepas menerima sampel kecil. Ia amat sesuai untuk pengesanan awal denggi penyakit dalam negara berpendapatan rendah.Rujukan
Chen, Po-Kai et al. “Advanced Detection Method untuk denggi NS1 Protein Using Ultrasensitive ELISA with Thio-NAD Cycling.” Viruses vol. 15,9 1894. 8 Sep. 2023, doi:10.3390/v15091894Kelebihan dan ciri-ciri produk BONTAC Thio-NAD/S-NAD
BONTAC adalah osalah satu daripada beberapa perusahaan di China yang boleh menghasilkan Thio-NAD, dengan “Bonzyme” Kaedah enzim penuh (mesra alam sekitar; tiada sadalaha pelarut berbahaya) dan unique “Bonpure” seven-step purification technology. BONTAC intergrates R&D, production and sale, dengan kilang milik sendiri dan beberapa pensijilan antarabangsa untuk memastikan kualiti tinggi dan bekalan produk yang stabil.
